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液相柱的填裝需要較高的技巧及熟練的技能

  • 發布日期:2018-10-16     信息來源:本站      瀏覽次數:1134
    •        液相柱的填裝,需要有較高的技巧和熟練的技能。因此,有人甚至將“裝柱”看作是“藝術加技術”。但是,隻要掌握了一些基本的規律和方法,任何實驗室都可以填裝出具有較高柱性能的液相柱。當然,目前大多數實驗室多是購買商品預填裝柱來滿足分離、分析之需。但是在一些有特殊需要的情況下,或為節省經費,在實驗室中自行填裝液相液相柱還是可取的。
        液相柱的正確使用和維護十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護液相柱。
        ①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使液相柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料,因此在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前所述)。
        ②應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。
        ③一般說來液相柱不能反衝,隻有生產者指明該柱可以反衝時,才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。(PS:推薦使用賽分液相柱)
        ④選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前麵連接一預柱,分析柱是鍵合矽膠時,預柱為矽膠,可使流動相在進入分析柱之前預先被矽膠“飽和”,避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
        ⑤避免將基質複雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內,需要對樣品進行預處理或者在進樣器和液相柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。(推薦成都摩爾科學儀器有限公司提供的色譜保護柱)
        ⑥經常用強溶劑衝洗液相柱,清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,對流路係統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右,即常規分析需要50~75ml。
        ⑦保存液相柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發幹燥。禁止將緩衝溶液留在柱內靜置過晚上或更長時間。
        ⑧液相柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進入柱內,使柱頭被汙染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。
      .  色譜柱在使用前,先進行柱的性能測試,並將結果保存起來,作為今後評價柱性能變化的參考。
        但要注意:液相柱性能可能由於所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是較佳條件),隻有這樣,測得的結果才有可比性。

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