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色譜柱的使用和維護注意事項

  • 發布日期:2017-11-13      信息來源:本站      瀏覽次數:1312
    • 色譜柱的正確使用和維護十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護色譜柱。
      1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料,因此在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前所述)。
       
      2、應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。
       
      3、一般說來色譜柱不能反衝,隻有生產者指明該柱可以反衝時,才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。
       
      4、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前麵連接一預柱, 分析柱是鍵合矽膠時,預柱為矽膠,可使流動相在進入分析柱之前預先被矽膠"飽和",避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
       
      5、經常用強溶劑衝洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,對流路係統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右。下麵列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,作為參考:
       
      矽膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次衝洗,然後再以相反順序依次衝洗,所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質,已烷使矽膠表麵重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次衝洗,再以相反順序依次衝洗。如果下一步分析用的流動相不含緩衝液,那麽可以省略zui後用水衝洗這一步。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞碸數次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質汙染。陽離子交換柱可用稀酸緩衝液衝洗,陰離子交換柱可用稀堿緩衝液衝洗,除去交換性能強的鹽,然後用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表麵的有機物)、甲醇、水依次衝洗。
      6、保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發幹燥。禁止將緩衝溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。
       
      7、色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進入柱內,使柱頭被汙染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。在後兩種情況發生時,小心擰開柱接頭,用潔淨小鋼將柱頭填料取出1-2mm高度(注意把被汙染填料取淨)再把柱內填料整平。然後用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內相同)填滿色譜柱,壓平,再擰緊柱接頭。這樣處理後柱效能得到改善,但是很難恢複到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5-30mm),可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效,這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以矽膠為基質的填料,隻能在pH2-9範圍內使用。柱子使用一段時間後,可能有一些吸附作用強的物質保留於柱頂,特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂的填料上。
       
      8、新的色譜柱在使用一段時間後柱頂填料可能塌陷,使柱效下降,這時也可補加填料使柱效恢複。每次工作完後,用洗脫能力強的洗脫液衝洗,例如ODS柱宜用甲醇衝洗至基線平衡。當采用鹽緩衝溶液作流動相時,使用完後應用無鹽流動相衝洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不鏽鋼管道,不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用,應每隔4-5天開機衝洗15分鍾。

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